As probas sorológicos: tipos, uso

O diagnóstico de laboratorio de practicamente todas as enfermidades infecciosas baséase na detección de anticorpos en sangue do paciente, que son producidos polo antíxeno patóxeno, os métodos serológicos. Entraron práctica médica a finais do século XIX - inicio do século XX.

O desenvolvemento da ciencia axudou a definir a estrutura antigênica de microbios e fórmulas químicas das súas toxinas. Pode crear soro non só terapéutico, pero tamén de diagnóstico. Son obtidos por administración de axentes patóxenos atenuados animais de laboratorio. Tras varios días de inmersión coellos ou Ratinho sanguíneos produtos utilizados para a identificación de bacterias ou as súas toxinas mediante probas serológicos preparados.

A manifestación externa desta reacción depende das condicións da súa formulación eo estado de antíxenos no sangue do paciente. Se os microbios son partículas insolúbeis establecerán-se, lisadas, inmobilizado ou ligada no soro. Os antíxenos son solubles, parece que o fenómeno de neutralización ou precipitación.

aglutinación (PA)

proba de aglutinación serológica é altamente específico. É fácil de realizar e é moi claro para detectar rapidamente a presenza de antíxenos no soro do enfermo. Tamén se usa para a creación de reacción Vidal (diagnóstico de febre tifoide e paratifóide) e Weigl (tifo).

El baséase nunha interacción específica entre anticorpos humanos (ou aglutininas) e células microbianas (agglyutenogenami). Tras a súa interacción están formadas partículas que precipitan. Este é un sinal positivo. Para a creación de reacción poden ser utilizados axentes microbianos vivos ou mortos, fungos, protozoos, células do sangue e células somáticas.

A reacción química é dividido en dúas fases:

1. composto específico anticorpos (AT) con antíxenos (Ag).
2. Non específica - a deposición de aglomerados de AG-AT, isto é, a formación do aglutinante.

Reacción de aglutinación indirecta (TPHA)

Esta reacción é máis sensible que o anterior. Utilízase para o diagnóstico de enfermidades causadas por bacterias, parasitos intracelulares, protozoos. É tan específica que pode detectar incluso concentracións moi baixas de anticorpos.

Pola súa formulación mediante glóbulos vermellos de ovella purificada e células vermellas do sangue de humanos pre-tratados con anticorpos ou antíxenos (que depende do que laboratorio quere atopar). Nalgúns casos, as células vermellas do sangue humano tratado con Imunoglobulinas. a resposta serológica de eritrócitos considérase válido da mesma precipitación ocorreu na parte inferior do tubo. A reacción positiva podemos dicir cando as células están dispostas en forma de paraugas invertida, ocupando o fondo enteiro. A reacción negativa é marcado cando as células vermellas do sangue instalarse en forma de columna ou botóns no centro do fondo.

reacción de precipitación (RP)

reaccións serológicas deste tipo serven para identificar moi pequenas partículas antíxenos. Este pode ser, por exemplo, proteínas (ou porcións dos mesmos), compostos de proteínas con lípidos ou hidratos de carbono, parte das bacterias e as súas toxinas.

Os soros para a reacción é obtido por infestación artificial de animais, polo xeral coellos. Neste método, pode obter absolutamente calquera soro precipitante. Estadios serológica mecanismo semellante precipitación de acción sobre aglutinación. Os anticorpos contidos no soro líganse aos antíxenos na solución coloidal para formar grandes moléculas de proteínas, os cales están depositados sobre o fondo do tubo ou o substrato (xel). Este método é considerado altamente específico e pode detectar incluso pequenas cantidades de substancia.

Usado para diagnosticar a peste, tularemia, o antraz, meninxite e outras enfermidades. Tamén implicado no exame forense.

proba de precipitación en xel

As probas serológicos poden realizar non só nun medio líquido, pero no xel de agarose. Isto chámase método de precipitación difusa. Con iso, o estudo da composición de mesturas complexas antigênicos. Este método baséase na quimiotaxia de antíxenos aos anticorpos, e viceversa. O xel que se moven en dirección un ao outro a velocidades diferentes e reunión para formar liñas de precipitación. Cada liña - un conxunto de K-AT.

Neutralización exotoxina antitoxina (RN)

antitóxica soro poden neutralizar a exotoxina que microorganismos producen. Con base nestes datos e probas serológicos. Microbioloxía utiliza este método para a titulación de soros, toxinas e Toxóides, así como a súa actividade terapéutica. A forza da neutralización da toxina é determinada por as unidades convencionais - AE.

Ademais, debido a esta reacción pode determinar as especies ou tipos pertencentes exotoxina. Se usa o diagnóstico de tétano, difteria, botulismo. O estudo pode ser realizado "sobre o vidro", e nun xel.

reacción de lise (RL)

O soro inmune, que entra no corpo do paciente, ten, ademais da súa función principal de inmunidade pasiva, mesmo e propiedades líticas. El é capaz de disolver os axentes microbianos, virais elementos celulares e estraños de entrar no corpo do paciente. Dependendo da especificidade dos anticorpos incluídos no soro illado bactericidin, citolisinas, spirohetoliziny, hemolisinas e outros.

Estes anticorpos específicos son chamados "complemento". Se pode atopar en case todos os fluídos corporais, que ten unha estrutura complexa de proteínas e é moi sensible ao incremento de temperatura, axitou-se, ácidos e luz directa do sol. Pero en seco é capaz de manter as súas propiedades líticas de ata seis meses.

Hai algúns tipos de probas sorológicos deste tipo:

- bacteriolysis;

- hemólise.

Bacteriólise é levada a cabo mediante soro do sangue do paciente e soro inmune específica con xermes vivos. Se, a continuación, o investigador ve a lise das bacterias, ea resposta será considerada como un número suficiente de complemento positivo está presente no sangue.

A segunda resposta serológica sangue é que a suspensión de eritrócitos tratada hemolisinas de soro contén paciente, que son activadas só na presenza dun complemento específico. Se hai, entón o laboratorio asistir a disolución das células vermellas do sangue. Esta reacción é amplamente utilizada na medicina moderna para determinar o título do complemento (isto é, a súa cantidade menor provocando lise das células vermellas do sangue), o soro do sangue e para a produción de ensaio de conexión do complemento. Foi deste xeito conducido reacción sorológica para sífilis - Wasserman.

fixación do complemento (RSK)

Esta reacción utilízase para detectar anticorpos no soro ao paciente dun axente infeccioso, así como para identificar o originador da súa estrutura antigénica.

Ata este punto describimos un simple test sorológicos. RAC considerado reacción difícil, xa que non interactúan dúas, senón tres elementos: un anticorpo, un antíxeno e complementaria. A súa esencia reside no feito de que a interacción entre o anticorpo eo antíxeno ocorre só en presenza de proteínas complementan os cales son adsorvidos na superficie do complexo formado K-AT.

Mesmos os antíxenos tras a adición de complemento, suxeitos a cambios substanciais, que indican a calidade da reacción. Isto pode ser lise, hemólise, inmobilización, bactericida ou bacteriostática.

A reacción en si ocorre en dúas fases:

1. A formación de anticorpos-antigénio, que non é visualmente perceptible investigador.
2. Cambiando o antigénio baixo a acción de complemento. Esta fase xeralmente pode ser Rastrexar ata a primeira ollada. Se a resposta visual non está visible, a continuación, usar o sistema indicador adicional que permite detectar cambios.

sistema de indicadores

Esta reacción está baseado na conexión do complemento. Os tubos de ensaio horas despois de definir RSK engadidos eritrócitos de carneiro purificados e hemolica de soro non contén complemento. Se o tubo se deixou complemento non ligada, isto pode xuntarse o complexo de N-AT formado entre as células de sangue de carneiro e hemolisina, e causar a súa disolución. Isto significaría que a DGC é negativo. As células vermellas do sangue permaneceu intacta, a continuación, de conformidade, a reacción é positiva.

hemaglutinação (RHA)

Hai dous hemaglutinação fundamentalmente diferente. Un deles - sorológico, é usado para determinar os grupos sanguíneos. Neste caso eritrócitos interactuar con anticorpos.

E a segunda reacción non está relacionado coa investigación serológica, xa que as células de sangue vermello reaccionan con hemaglutinina producida por virus. Xa que cada excitador actúa só en eritrócitos específicos (polo, carneiro, mono), podemos asumir esa reacción pouco específico.

resposta positiva ou negativa clara, é posible que a localización das células do sangue no fondo do tubo. Se figura se asemella a un paraugas invertida, entón o virus desexado está presente no sangue do paciente. E se as células vermellas do sangue formada como columnas da moeda, non hai axentes patóxenos descoñecidos.

A reacción de inhibición de hemaglutinação (HAI)

Esta reacción altamente específica, que permite establecer a forma, o tipo de virus ou a presenza de anticorpos específicos no soro do sangue do paciente.

A súa esencia reside no feito de anticorpos engadidos ao tubo que contén o material de proba, impide a deposición de antíxenos en eritrócitos, parando así a hemaglutinação. Esta é unha indicación cualitativa da presenza de antíxenos específicos no sangue a un virus particular que desexe.

Reacción de imunofluorescência (Rif)

A reacción é a base da capacidade para identificar complexos con microscopia de fluorescencia de AH-AT tras colorantes tratamento flyuorohromnymi. Este método é sinxelo de usar, non require illamento de cultura pura e leva pouco tempo. É indispensable para o diagnóstico rápido de enfermidades infecciosas.

Na práctica, estas probas sorológicos divídense en dúas categorías: directos e indirectos.

Rif directa producido antigénio que anteriormente procesado soro fluorescente. E indirecta é que o fármaco é primeiro tratado con diagnosticum convencional comprendendo anticorpos para o antigio desexado e, a continuación re-aplicado soro fluorescente, que é específico para as proteínas do complexo K-AT, e células microbianas se fan visibles por microscopia.